Informasjon

16: Simple Stain - Biology

16: Simple Stain - Biology



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Mål

  • Forbered et utstryk fra en bakterieprøve.
  • Forbered en enkel flekk av flekket.
  • Bruk mikroskopet til å identifisere funksjoner (form, arrangement, størrelse) av bakterien.

For å flekke bakterieprøven for mikroskopi må man først forberede utstrykingen på lysbildet. Dette innebærer i utgangspunktet tre trinn ---- overføring av en væskesuspensjon av bakterien på objektglasset, tørking av utstrykingen og deretter oppvarming litt for å feste utstrykningen til objektglasset. Når dette er gjort, begynner fargingsprosedyren.

Merk

IKKE gjør smøreopphengene dine for tykke. Fargestoffet vil ikke trenge godt inn, og det vil være altfor mange bakterieceller til å se individuelle former og arrangementer. Man må være forsiktig med tykke flekker når prøven tas fra et agarmedium.

ANBEFALING: Du kan synes det er nyttig å tegne en sirkel (voks blyant er best) på motsatt side av lysbildet hvor du vil spre smøret. Dette vil hjelpe deg senere med å finne utstrykingen, noen ganger et problem når du flytter lysbildet frem og tilbake på jakt etter bakteriene dine. Voksblyanten er bedre enn en tusj fordi den ikke vaskes lett av glasset.

MATERIALER TRENGES

  • NB kultur av Staphylococcus epidermidis
  • NA plate av E coli
  • fargekar
  • fargestoffreagenser
  • rene objektglass av mikroskop
  • voks blyant
  • heftig blottingpapir
  • nedsenking olje

PROSEDYRENE

  1. Sørg først for at du har noen rene lysbilder. Vi resirkulerer objektglassene våre, og flekker må fjernes fra glasset. Du vil bruke en rensepulvervæske som fungerer godt for å fjerne flekket og fargestoffet fra glasset.
    • Ta opp flasken med rensevæsken ved vasken, og hell litt av den tykke suspensjonen på lysbildet.
    • Bruk fingeren til å spre suspensjonen over hver side av objektglasset, og vask deretter godt med vann fra springen.
    • Tørk lysbildet.
  2. Du vil smøre ut med to forskjellige kulturtyper, en kjøttkraft og en agarkultur.
    • Merk de 2 lysbildene med navnene på bakteriene dine.
    • Rist kulturen først, overfør aseptisk en dråpe av buljongkulturen ved hjelp av en inokuleringssløyfe til et rent lysbilde.
    • Fra agarplatekulturen fjerner du et lite inokulum (bruk bare en liten mengde store kolonier) med en løkke og heng det opp i en liten dråpe destillert vann. Bland kulturen godt inn i vanndråpen.
  3. Merk 2 lysbilder ---Staph og E coli.
  4. Fordel smøreopphengene over glassglasset slik at det danner et tynt lag og er på størrelse med nikkel eller større. INGEN DEKSEL SLIP BRUKT!
  5. La lysbildet lufttørke-helt klart. Dette trinnet letter fiksering av utstrykingen til lysbildet.
  6. Varmefiks den tørre flekken ved å kjøre lysbildet raskt gjennom flammen noen ganger. Hvis fingrene blir varme, har du VARMEFIKSET FOR MYE. Varmefikseringen vil koagulere noe av proteinmaterialet og få suspensjonen til å feste seg til glassplaten.
  7. Et annet fargestoff vil bli brukt for hver bakterie.
    • E coli og krystallfiolett
    • Staphylococcus og safrinin
  8. Flekker smeten
    • Plasser lysbildet på trådnettet som sitter over fargestoffet.
    • Flom smøret ut med fargestoffet: la det sitte i 1 minutt.
  9. Vask lysbildet godt med destillert vann. Fjern flekkglasset med din ujevn papirpute.
  10. Se labøvelsen på MIKROSKOPI for hjelp med mikroskopet.
  11. Fokuser på prøven ved hjelp av 10X -objektivet (Vær sikker på at du er på brightfield -mikroskopi).
  12. Fokuser på flekket ved hjelp av 100X olje -nedsenkingslinsen. Sørg for å lese instruksjonene i MIKROSKOPI -øvelsen slik at du vet hvordan du går til 100X objektiv med olje.
  13. Identifiser de forskjellige formene og arrangementene til bakterier ved å bruke feltene nedenfor.

  1. RENGJØR LYSBILDENE med gliderenseren ved vasken.

SPØRSMÅL

  1. Hva er ulempen med å ha et skikkelig tykt utstryk ved flekker?
  2. Hvorfor er grunnleggende fargestoffer mer nyttige enn sure fargestoffer når de flekker bakterier?
  3. Hvorfor varmefiksere utstrykingen?
  4. Hvilke navn er gitt til figurene som sees i de to bakteriene som ble brukt i laboratoriet?

Spesiell flekkbiologi og bioteknologisk avdeling A The

v Mange bakteriearter kan eksistere i to svært forskjellige tilstander. v I gunstige miljøer eksisterer de som metabolsk aktive vegetative celler. v Når miljøet blir ugunstig, gjennomgår disse cellene prosessen med sporogenese og danner intracellulære endosporer.

v Når den vegetative cellen degenererer og dør, frigjøres endosporen som en spore. v Når forholdene blir gunstige, spirer sporen til å bli en vegetativ celle igjen. v Endosporen er svært motstandsdyktige differensierte bakterieceller som er svært motstandsdyktige mot varme, koking og uttørking og som er vanskelige å ødelegge, stabil i mange år.

v Ikke forveksle bakteriesporer med soppsporer, som er veldig forskjellige strukturer. v Flere tykke sporestrøk omgir bakteriesporer, noe som gjør sporene svært motstandsdyktige mot varme, kulde, uttørking, stråling og en rekke kjemiske midler (inkludert mange mikrobiologiske flekker). v Spesielle fargeprosedyrer må brukes for å visualisere sporer med sammensatt mikroskop.

v Malakittgrønn er den primære flekken. v I tillegg må flekken varmes opp for å trenge inn i sporejakken. v Bakteriene blir misfarget med vann. v Malakittgrønt er oppløselig i vann med mindre det er bundet til sporstrøkene. v Safranin er motfargen.

v Ved beskrivelse av spordannende bakterier oppgis plasseringen av endosporen vanligvis som sentral, terminal eller subterminal.

Fremgangsmåte 1. Gjør flekker av hver organisme separate lysbilder. på 2. La lysbildene lufttørke, og varmefiks deretter. 3. Påfør noen dråper malakittgrønn på bakteriene. Legg objektglassene direkte på en forvarmet kokeplate på lavt i 2-3 minutter. Ikke la flekken fordampe. Påfør ekstra flekk, om nødvendig.

4. Fjern lysbildene fra kokeplaten og la dem avkjøle. . 5. Skyll lysbildene forsiktig med vann. 6. Påfør nok safranin på lysbildene til å dekke bakteriene. La den sette seg i 30 sekunder. 7. Skyll lysbildene forsiktig med vann.

8. Tørk (ikke tørk) objektglassene med papir. La lysbildene lufttørke. 9. Undersøk objektglassene under nedsenking av olje. Bakteriene skal se rosa ut, sporene skal være grønne.

v Når en flekk, for eksempel et surt fargestoff, ikke kan trenge gjennom de ytre lagene av en mikrobe, vil cellen virke gjennomsiktig på en farget bakgrunn. v Denne flekken kalles en negativ eller bakgrunnsfarge. v Det utføres ved å blande fargestoffet med en suspensjon av bakterier på et lysbilde og spre blandingen i et tynt lag for visning.

v Kapsler: - er strukturer sammensatt av karbohydrat eller glykoprotein som ligger utenfor en organisme cellevegg og dermed er i direkte kontakt med miljøet. v Mange bakterier produserer kapsler under de rette forholdene. v Bakterier med kapsler: Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas putida

Kapselens funksjoner: - 1. Beskytt cellen mot uttørking (tørking). 2. Beskytt cellen mot fagocytter (blir oppslukt av hvite blodlegemer). 3. Gi en matreserve når visse organiske forbindelser er i overkant. 4. En virulens -determinant for patogene mikrober.

5. De fungerer som bindings- eller adhesjonsmidler for å feste cellene sammen og/eller til en overflate, for eksempel en stein i en rennende strøm eller en tann. Kapsler farges ikke lett og visualiseres derfor med negative flekkteknikker.

v Organismene tilberedes som et utstryk i nærvær av et surt fargestoff og får lufttørke fordi varme vil føre til at kapselen krymper. v Vanligvis blir den negative flekken (som farger bakgrunnen) fulgt av en enkel flekk for å farge bakterien. v Kapslen fremstår som et fargeløst lag mellom bakterien og bakgrunnen.

Fremgangsmåte: - 1. Bruk en vaksinål til å henge organismen i en dråpe India Ink i den ene enden av objektglasset. 2. Legg den korte enden av et rent mikroskopglass i suspensjonen og fordel blandingen over objektglasset for å danne et tynt lag. 3. La lufttørke. Ikke varmefikser.

4. Dekk smeten med metylenblått i 2-3 minutter. Skyll forsiktig med vann og la det lufttørke. 5. Undersøk med nedsenking av olje. 6. Diagram utseendet til organismen. Tolkning: Kapsler fremstår som klare soner (glorier) rundt den brytbare organismen.

MERKNADER: Eldre kulturer viser mer sannsynlig kapselproduksjon. 2. Når du utfører en kapselflekk på din ukjente, må du sørge for at kulturen du tar prøven fra er minst fem dager gammel. 3. Denne flekken brukes til direkte mikroskopisk undersøkelse av kapsler av mikroorganismer. 4. India -blekket gir en semi -ugjennomsiktig bakgrunn som de klare kapslene lett kan visualiseres mot.


Forskere bruker ofte en cellefargeteknikk på en prøve før de ser lysbilder under mikroskopet. Dette forbedrer hele eller deler av cellen for å gjøre det lettere å se. Farging er nyttig når du vil skille mellom levende og døde celler i en prøve, studere de enkelte komponentene i en celle, se vevsprøver eller markere en metabolsk prosess på tidspunktet for farging.

Rent jod ved romtemperatur er et ikke -metallisk, nesten svart fast stoff, ifølge Encyclopedia Britannica. Siden høyt konsentrert jod er giftig og kan skade hud og vev ved kontakt, fortynnes det imidlertid ofte. Jod blir lilla når det brukes i laboratoriet i den inneholdte dampformen. Ofte finner du jod i en proppflaske som en fortynnet brun væske, fordi den har blitt blandet med kalium for å redusere damptrykket og konsentrasjonen, noe som gjør det tryggere å bruke.


Simple Staining - Lab -rapport

● Utstrykingen ble lufttørket. ● Når alle tre utstrykene var tørre, ble de undersøkt under mikroskopet.

Diskusjon: I dette eksperimentet ble 3 mikroorganismer farget ved hjelp av krystallviolett i 15 sekunder og ble sett under et lysmikroskop ved bruk av olje -nedsenking. Bacillus subtilis (bilde 1) ble observert å være stavformet og noen celler ser ut til å ha dannet kjeder. Staphylococcus aureus (bilde 2) virket veldig befolket og tett. Cellene er samlet sammen med eter, noe som tyder på at for mange bakterier ble spredt over lysbildet, noe som gjorde det vanskelig å se som enkeltmennesker som i bilde 1. Når du så på Staphylococcus aureus under mikroskopet, var det også vanskelig å bestemme formen på prøven. På grunn av dette ble formen til Staphylococcus aureus undersøkt for å vite hvordan den skulle ha sett ut. Cellene til Staphylococcus aureus er avrundede og dannes i druelignende cl usters. (Mandal 2019). På bilde 2 ser cellene gruppert ut, men de er for nær eter til å ha blitt observert for å være avrundede. For å ha forbedret resultatene og observasjonen av Staphylococcus aureus, burde mindre vekst fra agar -skråningen vært forberedt og smurt på objektglasset under forberedelsen. Den mindre vekstmengden ville ha gjort det lettere å se enkeltceller og bestemme bakteriens form. Til slutt ble Escherichia coli (bilde 3), omtrent som Bacillus subtilis, observert å være stangformet også.

Konklusjon: En enkel flekk brukes for å markere hele mikroorganismen slik at mobilformene og grunnleggende strukturer blir mer synlige. Mikroorganismen er varmefiksert for å drepe bakteriene og feste dem til lysbildet. Krystallfiolett ble brukt som en enkel flekk på Escherichia coli, Staphylococcus aureus og Bacillus subtilis Disse mikroorganismer ble observert under et mikroskop.


Se videoen: Lab 3-5: Simple Stain (August 2022).